在进行WB实验时，您最害怕遇到什么问题呢？条带漂移、数据崩溃，深入一查竟然是内参选择不当所致！简单来说，内参就是细胞中的“稳定打工人”，其表达量稳如磐石，专门帮助您校正样品量，消除实验误差。没有内参的支持，半定量结果就像没有秤砣的秤——完全依赖于运气！

选择合适的内参

首先，查看分子量——目标蛋白和内参之间的分子量差距需超过5kD，才能避免条带重叠成“情侣装”。

抗体定位的准确性

其次，考虑抗体的定位——若检测核蛋白却使用了β-actin？那么核内根本没有它的身影！此时建议换用PCNA（29kD）或Histone H3（17kD），效果会更佳。

组织样本的差异性

不同组织的内参选择也很关键——例如，脂肪组织中的β-actin表达量微乎其微，直接选用GAPDH；而在肌肉样本中，tubulin可能不稳定，反而选择actin会更为可靠。

抗体的特异性

同一只β-actin，N端抗体在心肌组织中可能直接失踪，而C端抗体却依然能够稳定显现条带！因此，在购买抗体之前，一定要查清抗原位点，避免“组织特异性”导致实验失败。

建议总结

全细胞或胞浆样本中推荐使用β-actin或GAPDH；核蛋白样本中优选PCNA或Histone H3；大蛋白中则可采用β-tubulin。对于特殊样本，务必要查阅文献再进行购买！只有选择稳妥的内参，WB实验的结果才能够更加可靠。

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