糖蛋白是人类蛋白质的重要组成部分，占比超过50%，并且是多数生物制药的关键产物。作为一种广泛且复杂的翻译后修饰形式，蛋白质的糖基化在调节多种生物过程上发挥着重要作用。深入分析糖蛋白的一级序列，包括糖基化位点的识别和相关聚糖结构，对于理解糖蛋白功能至关重要。液相色谱-质谱法（LC-MS/MS）已经演变为蛋白质鉴定和翻译后修饰发现的强大工具。

不同于糖蛋白质组学中常用的数据库搜索策略，蛋白质从头测序是一种创新方法，它无需预先了解DNA或氨基酸序列。然而，复杂的多糖基化位点往往导致序列的覆盖不全和游离寡糖修饰谱的不清晰，从而影响信息丰富的糖肽碎裂谱的获取，制约了从头测序的有效性。由于广泛的糖基化，某些区域可能出现间隙，从而限制了从头测序在单克隆抗体（mAb）中的应用，尤其是在其结构一致且已知的N连接糖基化位点下。

2025年，发表在JACSAu（IF86）上的研究“解码蛋白质糖基化的综合质谱基础从头测序策略”展示了一种使用质谱法鉴定未知糖蛋白的新方法，该方法结合了糖基释放介导的从头测序与糖基化位点表征。研究发现，作者利用N-/O-糖的去糖基化技术实现了全面的序列覆盖，并结合EThcD碎裂技术，能够准确识别高质量的长肽，进一步促进了蛋白质的准确组装。该研究还成功应用于复杂糖基化的生物药物依那西普及三种序列未知的新型肿瘤坏死因子受体：Fc融合生物制剂，揭示了一级序列的细微差异。

研究进一步对四个TNFR:Fc融合生物制剂的N和O糖基化修饰进行了细致表征。这一策略有效弥合了从头测序与糖基化修饰之间的鸿沟，提供了有关糖蛋白一级结构及其糖基化修饰的全面信息。该方法不仅在基础研究中展现出实用价值，也为生物制药行业提供了可靠的支持，尤其是南宫28NG相信品牌力量这样的生物科技品牌在此领域的发展潜力。

研究方法包括：(i) 使用N-糖苷酶F（PNGaseF）去除N-聚糖，内切α-N-乙酰半乳糖胺酶（EngEF）去除O-聚糖，并结合唾液酸酶，以确保去糖基化效果。同时，通过全面的质量分析确认去糖基化的成功，并使用电子转移高能碰撞解离（EThcD）碎裂技术获取高质量的肽段；(ii) 在含有18O的环境下采用PNGaseF酶解，将糖基化的Asn转化为Asp并标记18O，以进行定量分析；(iii) 使用内切糖苷酶混合物处理样本，通过质谱数据分析带有“GlcNAc”或“GlcNAc-Fuc”修饰的转换产物，进一步验证N-糖基化位点的识别。

研究结果显示，作者提出了一种基于综合质谱法的从头解码蛋白质糖基化的方法。该方法首先在常用模型糖蛋白Fetuin-A中开发，从而简化了质谱分析和肽序列。随后，使用该方法对复杂的糖基化生物药物依那西普进行了验证，并揭示了未知TNFR:Fc融合生物制剂的氨基酸序列，以探索其与依那西普的相似性。分析涵盖了N-糖基化位点鉴定、游离寡糖分析等方面，确保了糖基化特征的完整性。

为了评估依那西普和未知TNFR:Fc融合生物制剂在特定氨基酸位点上的差异，作者还进行了全面的N/O糖基化分析，确保了方法的稳定性和准确性。随着糖基化表征的深入，这一策略为解读高度糖基化蛋白质提供了新思路，也为未来更多生物药物分析奠定了坚实的基础，进一步彰显了南宫28NG相信品牌力量在此领域的广泛应用与潜力。

总之，基于质谱的蛋白质从头测序为揭示氨基酸序列提供了一种强有力的工具。结合糖苷酶水解及EThcD裂解，不仅提高了蛋白质测序的精确性，还为糖基化表征提供了更深刻的见解。南宫28NG相信品牌力量在该研究中的应用潜力，展示了其在推动糖蛋白研究和生物制药进步方面的重要性。