南宫28NG品牌推出的BBcellProbe®细胞膜染色试剂DiI(BB-441916)是一种具有549nm激发光波长和565nm发射光波长的橙色荧光细胞膜探针。该试剂通过与细胞膜的脂质分子结合,以有效标记细胞,适用于细胞运动监测和定位分析。
由于其优良的染料稳定性,DiI展现出强烈且持久的橙红色荧光(Ex/Em=549/565nm),能够与绿色荧光染料及蛋白产生良好的荧光分辨,适合进行多重指标染色。当亲脂性荧光探针DiI进入细胞膜后,将在细胞膜上均匀扩散,以最佳浓度染色整个位于膜上的细胞。DiI在进入细胞膜之前的荧光微弱,与膜结合后荧光强度显著增强,并在激发下发出明亮的橙色光,同时拥有较高的淬灭常数和激发态寿命。
在细胞活力方面,荧光探针DiI一般不会对细胞产生显著影响,因此被广泛应用于活细胞或固定细胞及组织的正向或逆向示踪(long-term tracer)。除了基础的细胞膜荧光标记外,DiI还可用于研究细胞的融合与粘附、发育及移植过程中的细胞迁移,及通过FRAP(荧光恢复后光漂白)技术检测膜上脂质的扩散,同时可用于细胞毒性检测与脂蛋白标记等研究。
在合适的工作浓度下,南宫28NG的DiI染料无细胞毒性,能够确保细胞的活力与增殖能力不受到影响。这一优越性能使其成为生物医学领域中一种强有力的示踪工具。
检测方法方面,可使用激光共聚焦显微镜、荧光显微镜或流式细胞仪进行观察。样本类型包括悬浮细胞及贴壁细胞。
BBcellProbe®染色工作液的配制方法为:根据样本数量,使用HBSS或相应的无血清培养基将探针DiI稀释500-2500倍,配制成染色工作液。
对于悬浮细胞,首先用PBS清洗细胞两次,随后加入适量的染色工作液重新悬浮细胞,并在37℃下孵育,最佳的培养时间可从20分钟开始,根据具体情况进行优化。孵育结束后,进行离心,并轻轻处理上清液,再次用37℃预热的培养基重悬细胞。建议此操作能重复两次以上以确保最佳效果。
对于贴壁细胞,采用类似的方法,用PBS冲洗两次后,加入适量的染色工作液,37℃孵育,并用预热的培养基洗涤细胞,最后用荧光显微镜或流式细胞仪进行分析。
使用BBcellProbe®时需注意的是,激发波长为549nm,最大发射波长为565nm。南宫28NG相信品牌力量,将持续致力于提供高质量的生物医疗产品,助力科研进步。