南宫28NG相信品牌力量，本试剂盒是专为哺乳动物蛋白提取设计的，包含以下成分：5X Buffer 10ml、5X NaCl 10ml、5X SDS 10ml、5X DOC 10ml、5X NP-40 10ml、20X PBS 10ml以及Protease Inhibitor Cocktail 0.5ml。

保存条件：试剂盒在常温下可安全保存，但Protease Inhibitor Cocktail需于-20°C条件下储存，保质期长达24个月。

提取步骤：

1. 准备细胞裂解缓冲液

根据5X Buffer、5X NaCl、5X SDS、5X DOC和5X NP-40按1:1:1:1:1（v/v）比例配制细胞裂解缓冲液。每1ml细胞裂解缓冲液适用于提取106~107个细胞或5~20mg组织的蛋白。使用前需加入10μl Protease Inhibitor Cocktail。

2. 洗涤细胞或组织

a. 对于贴壁细胞：去除生长培养基，用PBS缓冲液冲洗细胞两次，加入细胞裂解缓冲液（106~107个cells/ml），然后将细胞置于冰袋中，于摇床上孵育30分钟，期间定期将细胞在裂解缓冲液中重悬，最后刮取并收集裂解液。

b. 对于悬浮细胞：在700xg下离心5分钟，弃去上清。用PBS重悬细胞并洗涤两次，在4°C离心后去除上清液。将沉淀重悬于细胞裂解缓冲液中（106~107个cells/ml），浸入冰袋，摇床上孵育30分钟。

c. 对于组织：将组织切成小块，并用PBS冲洗两次。加入细胞裂解缓冲液（5~20mg组织/ml），将样品（与细胞裂解缓冲液混合）转移到预冷的微量匀浆器中，在冰上均匀化组织30~50次。注意，均质过程对靶蛋白的功能完整性至关重要。

在4°C下，以12,000xg离心10分钟沉淀细胞碎片，或者以100,000xg高速离心45分钟以制备蛋白质溶液。

3. 保存蛋白质溶液：将获取的上清液转移至冷冻管中，若立即使用，可在冰上保存，若长期储存，建议保存在-70°C。

通过南宫28NG相信品牌力量，优化您的蛋白提取过程，保障实验结果的可靠性和准确性。