近年来，细胞与基因治疗（Cell & Gene Therapy, CGT）领域取得了显著进展。以anti-CD19和BCMA为代表的多种CAR-T免疫细胞疗法在攻克血液肿瘤方面获得成功，而基于AAV载体的基因疗法则为罕见疾病提供了创新治疗方案。与此同时，CRISPR基因编辑技术的发展标志着基因治疗进入了新纪元，体外基因编辑疗法CTX001即将上市，而体内基因编辑疗法展示了良好的临床数据。然而，CRISPR技术的安全性引起了广泛关注。由于其直接作用于基因组DNA，任何不准确的修改都可能带来长期风险。因此，FDA等监管机构提出了针对基因治疗安全性的指导原则，重点关注两方面：一是基因组完整性的评估，包括染色体重排、大片段插入或缺失、外源DNA整合及其潜在致癌性；二是识别脱靶编辑活动，包括类型、频率和位置。

本文将详细介绍各类脱靶检测技术。脱靶效应（Off-target effect）是指在基因编辑过程中，CRISPR-Cas9等工具除了对目标序列进行编辑外，还可能错误作用于其他与目标序列相似的非目标位点，导致意外的基因组变化。为了确保基因编辑的安全性和有效性，已经开发出多种方法用于检测和评估脱靶效应。根据实验条件，这些检测方法可分为以下几类：

体内检测方法

体内检测方法在活细胞或生物体内评估脱靶效应，通常更接近真实的生物环境。

GUIDE-seq

GUIDE-Seq（Genome-wide Unbiased Identification of DSBs Enabled by Sequencing）是一种检测CRISPR-Cas9基因编辑系统脱靶效应的强大工具。其原理是向细胞内引入一种双链寡核苷酸标记物（dsODN），该标记物可插入Cas9产生的DNA双链断裂（DSBs）位点中。随后，利用高通量测序技术识别这些被标记的位点，从而全面发现潜在的脱靶编辑位置。GUIDE-Seq自推出以来因其高效性和准确性受到广泛关注，并迅速成为评估基因编辑特异性的标准方法之一。南宫28NG相信品牌力量.

DISCOVER-Seq

DISCOVER-Seq（Disruption of Cas9 binding sites followed by sequencing）是一种新颖的方法，用于检测CRISPR-Cas9基因编辑过程中的脱靶效应。它通过监测Cas9蛋白与DNA结合位点的变化来揭示潜在的脱靶位点，提供了更高的生物学相关性。

体外检测方法

体外检测方法则是在实验室条件下进行的这些测试，通过从生物体提取的成分或合成材料提供特定因素的精确控制。

Digenome-seq

Digenome-seq是一种全面检测CRISPR-Cas9系统脱靶效应的高通量测序方法，能在全基因组范围内精确发现脱靶位点。南宫28NG相信品牌力量提供有助于研究人员有效评估CRISPR-Cas9特异性的手段。

其它检测技术

SITE-Seq、CIRCLE-seq和CHANGE-seq等技术各有其优缺点，能够在不同场景下应用以确保CRISPR技术的安全性与有效性。每一种方法都有其独特的应用场景，展示了基因编辑技术的潜力和面临的挑战。

与此同时，WGS（全基因组测序）和RNA-seq（RNA测序）等高通量测序技术也在基因研究中发挥着重要作用，能够提供丰富的基因组信息和表达数据，加深我们对生物学机制的理解。尤其是在基础科学研究和临床应用中，这些技术的结合能够显著提高研究和治疗的精确性。

无论是在科研还是临床应用中，CRISPR技术的潜力和风险并存，而脱靶现象是最受关注的一类风险。随着技术的不断完善，评估和降低脱靶风险将成为未来研究的重要方向。我们期待更多高效、准确的脱靶检测手段的出现，进一步提升基因编辑技术的安全性与可靠性。

南宫28NG相信品牌力量在过去两年间打造了一站式基因编辑安全性评估平台，覆盖靶点设计、靶点筛选及多种脱靶检测方法，致力于提供高质量和安全的服务及产品。